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北京合法代孕哪个最好用|12318_α和β地贫哪个遗传给宝宝后比较严重?_vR7Nh_1i

时间:2023-03-12   浏览量:960

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α和β地贫不能直接比较哪个遗传给宝宝比较严重,因为地贫要区分轻度、中度、重度地贫。如果α地贫和β地贫都是属于轻度那么遗传给宝宝都不严重,轻度地贫即使遗传给宝宝身体也不会出现明显的症状。

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但是中度和重度的α和β地贫无论哪一个遗传给宝宝都一样严重,宝宝会出现一系列严重的并发症,比如都会出现严重的溶血性贫血、肝脾肿大、黄疸、营养不良。宝宝遗传上中重度的α和β地贫随时都会有生命危险。所以不能直接的比较α和β地贫哪个遗传给宝宝严重。下面是α、β遗传给宝宝的症状:

α地贫β地贫遗传的区别
轻型症状中度症状重度症状α地贫基本无症状持续性的黄疸、肝脾增大库氏面容、肝脾明显肿大β地贫基本无症状颅骨长骨皮质层变薄、黄疸慢性进行性贫血、肝脾肿大

齐鲁晚报·齐鲁壹点记者 高雅洁

2月22日,青岛市政府宣布,自2022年1月起,青岛市进一步提高生育医疗费支付标准,年增加医保基金支出1.4亿元。其中,将产前检查费用的定额补助标准由每人700元提高至1600元。

据了解,2021年7月,中共中央、国务院提出实施三孩生育政策及配套措施。为进一步发挥生育保险的保障功能,降低育龄妇女生育成本,自2022年1月起,青岛市进一步提高生育医疗费支付标准,年增加医保基金支出1.4亿元。

产前检查补助标准大幅提高。将产前检查费用的定额补助标准由每人700元提高至1600元。同时,减化优化报销流程,在产妇分娩出院时由医保基金直接定额支付给个人,参保人无需提供各项票据。

分娩费用结算标准全面提高。对参保职工个人来说,医保范围内的分娩医疗费个人无需负担。但医保对医疗机构的结算是采取不分分娩方式、定额结算的方式,目的是用医保支付的杠杆,规范医疗机构诊疗行为,遏制过度采用剖宫产等不合理行为。根据医疗机构服务水平及能力的提升实际,提高了分娩费用的结算标准:一级医院由2000元提高至2800元,二级医院由3300元提高至4600元,三级医院由4200元提高至5900元,平均调整幅度达到40%以上。

提高生育并发症报销标准并扩增相关病种。孕产妇在怀孕和生产过程中,发生的生育并发症实行限额报销。本次对住院保胎及并发症、子宫肌瘤剔除术等限额报销标准作了不同程度提高,总共涉及30多个病种,大部分病种的结算标准提高了1倍。同时,将试管婴儿技术中常用的减胎治疗纳入生育病种保障范围,保障健康胎儿发育,减轻生育家庭负担。

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ELISA样本制备指南及注意事项

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定义及介绍

ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,酶联免疫吸附测定)是最基础的免疫学实验之一,其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本,实验操作步骤并不繁琐,但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值,从而供下一步分析所用,因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。


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样本制备指南


1

血清

全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃,1000×g离心20min,取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血,高血脂样品


2.血浆

抗凝剂推荐使用EDTA-Na

2

,样品采集后30min内于2-8℃,1000×g离心15min,取上清即可检测。

3组织匀浆/组织全蛋白

用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃,5000×g离心5-10min,取上清检测。

其余方法:在分析天平(AL204型)上,称量50-100mg组织样本。在样本中加入5倍质量体积的含1%PMSF的1×PBS缓冲液;并用小剪刀等工具将组织样本剪碎(尽可能小块)。注:1×PBS缓冲液使用前,需加入PMSF,现用现加,PMSF终浓度为1mM。打开超声破碎仪,将超声破碎仪的功率调至25%,超声时间2s,间隔时间5s,总时间2min。放入样本,冰上超声3min。视样本匀浆情况调整总时长。超声完成后,将样本放于4℃或冰上裂解30min。打开离心机,将转速调至12000×g;将样本放入离心机,离心10min,取上清,按需要分装,于-20℃贮存。注:留取20μL样本,用于后续BCA法测定样本蛋白含量。

组织匀浆液或组织全蛋白中的蛋白浓度对于检测实验的影响至关重要,建议样本蛋白浓度至少1mg/mL以上,较低浓度蛋白的组织匀浆液有可能导致ELISA检测失败。


4.细胞提取液

贴壁细胞

用冷的PBS轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g离心5min后收集细胞;

悬浮细胞

可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10

6

个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂;若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃,1500×g离心10min,取上清检测。注:留取20μL样本,用于后续BCA测定。

其余方法:

对于

贴壁细胞

:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。以2百万细胞为例,在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液,震荡混匀细胞,4℃或冰上裂解30min。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。必要时可以进行超声处理,超声步骤与组织样本相同。

对于

悬浮细胞

:离心收集细胞,以2×10

6

细胞为例,在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液,震荡混匀细胞,4℃或冰上裂解30min。用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成(5-10)×10

5

细胞/管,然后再裂解。必要时可以进行超声处理,超声步骤与组织样本相同。注:1×PBS缓冲液使用前,需加入PMSF,现用现加,PMSF终浓度为1mM。打开离心机,将转速调至12000×g;将样本放入离心机,离心10min,取上清,按需要分装,于-20℃贮存。注:留取20μL样本,用于后续BCA法测定样本蛋白含量。



5.细胞培养上清或其他生物体液

收集液体后于2-8℃,1000×g离心20min,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。注:因细胞培养基中的胎牛血清影响或其他生物体液中杂蛋白的影响,不建议进行BCA法测定样本蛋白含量。

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实验细节与注意事项

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收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎,释放大量的过氧化物酶,会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)的酶促反应,造成检测结果的不确定性。

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2



样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(3个月内检测),避免反复冻融。在检测前,冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。

0

3


试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围,建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果样品中待测物浓度过高或过低,请对样本做适当的稀释或浓缩。

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检测样本的稀释推荐多步稀释法,常规稀释检测为血清/血浆检测稀释度为2倍、20倍、200倍;细胞上清稀释度为5倍、50倍、500倍;建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度。

对于稀释倍数比较大的检测样本,参考稀释方案如下:

稀释100倍:一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内,做100倍稀释;

稀释1000倍:两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内,做20倍稀释,再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释1000倍;

稀释100000倍:三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内,做40倍稀释,再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释100000倍;

每步稀释时取液量不少于3μL,稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀,避免起泡。


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若所检样本不在说明书所列样本之中,建议做预实验验证其检测有效性。

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若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液,由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。

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某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。

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对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本,经BCA法测定样本蛋白含量后,建议进行蛋白浓度的统一化,避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差;例如,统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL,进行后续的稀释和检测。


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参考资料